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Elisa試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)操作方法
更新時(shí)間:2017-01-12   點(diǎn)擊次數(shù):1616次

ELISA試劑盒對(duì)試劑預(yù)備一般不太注意,一般的做法是,在試驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來(lái)即用,而疏忽了這種做法有也許影響后邊溫育時(shí)刻不行的疑問(wèn),其直接的結(jié)果是對(duì)一些弱陽(yáng)性標(biāo)本的檢查呈現(xiàn)假陰性。因此在ELISA測(cè)定中試劑的預(yù)備zui為要害的是,在試驗(yàn)開(kāi)端前,將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái),在室溫下放置20分鐘以上后,再進(jìn)行測(cè)定,以使試劑盒在運(yùn)用前與室溫平衡。這么做的意圖,主要是為了在后邊的溫育反響步驟中,能使反響微孔內(nèi)的溫度能較快地到達(dá)所請(qǐng)求的高度,以滿意測(cè)定請(qǐng)求。其次,如今的產(chǎn)品ELISA試劑盒中的洗板液均需在試驗(yàn)室運(yùn)用時(shí)對(duì)所提供的濃縮液稀釋制造,因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)確保質(zhì)量。此外,當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時(shí),則底物溶液應(yīng)在反響顯色前暫時(shí)制造。

在如今的ELISA試劑盒產(chǎn)品試劑盒中,血清樣本的參加幾乎是*的要運(yùn)用微量加樣器參加樣本的步驟。運(yùn)用微量加樣器加樣有必要注意的要害點(diǎn)是:加樣不行太快,要避免加在孔壁上部,不行濺起和發(fā)生氣泡。加樣太快,無(wú)法確保微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易致使非特異吸附。濺起會(huì)對(duì)附近孔發(fā)生污染。呈現(xiàn)氣泡則反響液界面有區(qū)別。試劑的參加在國(guó)產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加,除了要注意滴加的角度外,滴加的速度也很主要,滴加太快,很簡(jiǎn)單呈現(xiàn)重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象,這么就會(huì)在孔內(nèi)的非包被區(qū)呈現(xiàn)非特異吸附,然后導(dǎo)致非特異顯色。所以,有時(shí)候一份標(biāo)本用一樣的試劑盒這次測(cè)定為陽(yáng)性,下次測(cè)定為陰性,通常即是上述加樣及試劑的過(guò)錯(cuò)所造成的。

溫育是ELISA試劑盒測(cè)定中影響測(cè)定勝敗zui為要害的一個(gè)要素。ELISA作為一種固相免疫測(cè)定,抗原抗體的反響在固相上進(jìn)行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*,有必要在必定的溫度條件下反響必定的時(shí)刻。溫育所需時(shí)刻與溫度成反比,即溫度越高,則所需時(shí)刻相對(duì)較短。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。

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