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? 通蔚生物實(shí)驗(yàn)室中細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)常見的問題解答
更新時(shí)間:2024-01-18   點(diǎn)擊次數(shù):1226次

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)是觀察掌握細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)過程中細(xì)胞活動(dòng)的重要實(shí)驗(yàn)方法。

問題一:細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)為什么這么重要

答:因?yàn)榧?xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)是觀察細(xì)胞遷移活動(dòng)的重要技術(shù)手段,而且簡單快捷、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠(劃重點(diǎn))。


問題二:細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)為什么一般選擇6孔板

答:因?yàn)?孔板大小適中,可保證有相當(dāng)距離的平直劃痕,便于觀察;當(dāng)然若是需要高通量初篩時(shí),也可以用12或者24孔板。


問題三:為什么細(xì)胞接種密度要求過夜100%融合

答:如果過夜后細(xì)胞=沒有100%融合,雖然可以適當(dāng)延長培養(yǎng)時(shí)間,但因細(xì)胞密度已經(jīng)很大,所以細(xì)胞狀態(tài)會(huì)逐漸變差,后續(xù)細(xì)胞可能不遷移而是凋亡。


問題四:怎樣避免細(xì)胞增殖對(duì)細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)造成的假陽性結(jié)果

答:操作如下:

1、使用無血清或低血清培養(yǎng)基(<2%)可降低細(xì)胞增殖對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響

2、一般認(rèn)為24h為細(xì)胞的一個(gè)周期,在選取合適的時(shí)間點(diǎn)(6,12,24h)檢測劃痕寬度時(shí),不要超過細(xì)胞一個(gè)周期的時(shí)間。


問題五:結(jié)果怎樣拍照

答:按照6孔板背后畫線的垂直方向劃痕,可以形成若干交叉點(diǎn),劃痕一次與5條定位線相交,就有10個(gè)可固定監(jiān)測點(diǎn),以解決了前后觀察時(shí)位置不固定的問題。


問題六:細(xì)胞不遷移怎么回事

答:避開細(xì)胞狀態(tài)的影響,需要考慮細(xì)胞自身的遷移能力,并非所有細(xì)胞都適合劃痕實(shí)驗(yàn)。


問題七:結(jié)果統(tǒng)計(jì)中,細(xì)胞計(jì)數(shù)和統(tǒng)計(jì)面積那個(gè)好用

答:根據(jù)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇。如果細(xì)胞遷移輪廊比較清晰,并且遷移數(shù)量不多,我們可以選擇細(xì)胞計(jì)數(shù);但如果細(xì)胞數(shù)比較多,連片生長,那么統(tǒng)計(jì)面積比細(xì)胞計(jì)數(shù)的方式更簡便且客觀。


問題八:細(xì)胞劃痕技術(shù)有什么不足嗎

答:細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)的不足主要包括:

1、適用的細(xì)胞類型范圍小,一是需要遷移強(qiáng)的細(xì)胞,而且對(duì)無血清的環(huán)境有較強(qiáng)的忍受力(至少24h)12h細(xì)胞凋廣就超過50%。

2、自身操作的實(shí)驗(yàn)誤差,如劃痕距離不一致等。


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